Orateur
Description
La theilériose est une maladie causée par les protozoaires du genre Theileria. La RT-PCR FRET s’est révélée plus sensible et spécifique que les autres tests moléculaires pour la détection des Theileria spp. Sa mise en œuvre a longtemps requis un contrôle positif externe à base d’un clone du gène CoxIII provenant de Theileria parva. L’objectif de ce travail était de construire un plasmide à partir d’une séquence synthétique de nucléotides et de valider son utilisation comme un contrôle interne dans le test de RT-PCR FRET, pour détecter les parasites du genre Theileria. Sa construction était basée sur la conception d’une séquence synthétique CoxControlFF qui a été amplifiée, purifiée et clonée dans un plasmide vecteur pCR2.1®-TOPO® TA selon la méthode TOPO TA Cloning®. Le plasmide recombinant a été multiplié par transformation chimique d’une bactérie compétente d’E. coli One Shot® TOP10 qui a été ensuite mise en culture pour multiplication. L’extraction de l’ADN du plasmide à partir de cette bactérie sur papier filtre a été faite en combinaison avec celui des échantillons des Theileria spp. sur papier filtre, en suivant le même protocole. Le plasmide a été validé comme contrôle interne après son utilisation avec plusieurs échantillons dans la RT-PCR FRET. Les résultats ont montré que la construction du plasmide a été une réussite. La Tm du contrôle était de ± 71,2°C alors que la Tm la plus élevée des différentes espèces de Theileria était de ± 64°C. Les espèces T. annulata, T. parva, T. velifera, T. taurotragi/buffeli, T. mutans1 et T. mutans2 ont pu être détectées. Toutefois, une compétition entre le contrôle et les Theileria spp. a été constatée avec la possibilité de domination des Theileria spp. par le contrôle. Il serait intéressant de déterminer la concentration convenable du contrôle à utiliser pour toutes les espèces.
